2X H-TECH PCR Premix
4/22/2025 21
2X H-TECH PCR Premix
2x PCR Premix 是一种2倍浓度的PCR反应预混体系，体系中除了有PCR反应的必要组分外，还有PCR反应增强成分和稳定试剂保存能力组分。使用该试剂进行PCR实验，能减少大部分琐碎的PCR反应试剂配制操作，避免出现操作过程中可能会出现的少加、漏加或者重复加样情况，节省时间，大大降低了操作过程中污染的概率，最大程度保证了实验的成功率。
一.使用特别注意事项：
1. 此试剂为多种物质混合物，久置可能会有微量沉淀生产，为正常现象，任何时候使用前请务必混匀；
2. 长期保存请冻存于-20℃，一周内使用可以置于4℃保存;
3. 本试剂95℃预热时间最低不少于0.5 min；
试剂和引物、模板混合后请尽快进行实验，以确保得到最理想的结果。
二.配样举例：
| 试剂 | 20μl体系（其他体系按比例调整） | 终浓度 |
| 2x PCR Premix | 10.0μl | 1× |
| PCR Forward Primer（10μM） | 0.4μl~0.5μl | 0.2~0.25μM |
| PCR Reverse Primer（10μM） | 0.4μl~0.5μl | 0.2~0.25μM |
| DNA template | 1ng~100ng（cDNA推荐） | 0.05~5 ng /μl |
| ddH2O | 补水至20μl |
三．程序举例：
（以bio-rad CFX96为例，对模板浓度为5ng/ul、长度为1000bp的目的基因进行扩增）
95℃ 3 min；
GO TO40个循环
95℃ 10s
60℃ 25s
72℃ 60s
72℃ 5min
16℃ 保温
四： PCR常见问题及其解决方案参考：
| 问题 | 可能的原因 | 解决方案 |
| 没有扩增产物或扩增产物量很低 | 目标基因的拷贝数过低或模板降解 | 增加模板浓度或使用新提取模板 |
| 模板降解或含有抑制聚合酶活性的抑制剂 | 对模板进行纯化或重新提取 | |
| 引物设计不合理或者引物降解 | 重新设计引物或使用新溶解的引物 | |
| 试剂久置 ，但使用前没有混匀 | 试剂使用前记得混匀 | |
| 产生非特异性扩增或引物二聚体 | 引物设计不合理 | 考虑重新设计引物 |
| 模板浓度极低 | 增加模板浓度或使用新提取模板 | |
| PCR反应组分或环境存在污染 | 更换PCR反应组分，使用带滤芯的枪头 |