Pfu DNA 聚合酶

UltraPF  DNA Polymerase Kit,,100ul ,500U500U,100ul支GDQ6009UltraPF  DNA Polymerase Kit,,200ul,1000U1000U,200ul支

贮存条件：-20℃

产品说明：本酶是一种高保真的耐热性DNA聚合酶，其保真度是Taq DNA聚合酶的8~10倍。该酶不仅具有5′-3′DNA聚合酶活性，还具有3′-5′核酸外切酶校对活性，能及时切除DNA合成链中碱基错配的核苷酸，大大增加了碱基配对的正确率，保证了DNA合成的高度忠实性。该酶不具有5′-3′核酸外切酶活性。

产品来源：E.coli重组菌株，含有从Pyrococcus furiosus中克隆的基因。活性定义：以小牛胸腺DNA为模板，在72℃反应30min，能催化10nmol的dNTP聚合为多核苷酸片段的酶量定义为1个活性单位（U）。

产品浓度：5U/μl

储存缓冲液：[PH8.0] 20 mM Tris-HCl，100 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1 % NP-40 (v/v)，0.1 % Tween-20(v/v)，1 mM DTT，50 %甘油（v/v）。

反应缓冲液：[10×Pfu Buffer（含Mg2 ）] 200 mM Tris-HCl（PH 8.8），100 mM KCl，160 mM(NH4)2SO4，1 % Triton X-100，1 mg/ml BSA，20 mM MgSO4

操作步骤：

用户自备试剂：dNTP混合物；水（无核酸酶）；引物（上游、下游）；模板

1．PCR反应体系的建立：

所有溶液完全融化后，温和充分振荡；

加入薄壁的PCR管中，冰上操作；50μl反应体系如下：

组分	加入体积（μl）	终浓度
10X Buffer with Mg2	5	1X
dNTP Mix,10mM	1	0.2 mM
上游引物	X	0.1-1.0μM
下游引物	Y	0.1-1.0μM
pfu (5 U/μl)	0.5	2.5 U
DNA模板	Z	<0.5μg/50μl
加水至	50μl

Note：Pfu酶需在dNTPs加入后再加，否则Pfu酶的保真活力可能会降解引物，导致非特异性条带产生，产物得率下降。

2． PCR反应循环设置

程序	温度	时间	循环次数
预变性	95°C	2 min	1
变性	95°C	2 min	25-35
退火	42-65°C	0.5-1 min
延伸	72°C	2 min/kb
最后延伸	72°C	5 min	1

3．结果检测：

反应结束后取5μl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

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