磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量基因组DNA。经过特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷且提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA在A260/A280的紫外吸收均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。
货 号 | 名 称 | 规 格 |
GD603-10 | 磁珠法血液基因组DNA提取试剂盒 | 100T |
适用范围
从抗凝血全血中提取基因组DNA,适用于核酸自动化提取平台。
试剂盒包装及组成
试剂盒组成 | 数量 |
裂解液S1 | 50ml*1 |
裂解液S2 | 20ml*1 |
结合液 | 50ml*1 |
磁珠 | 3.5ml*1 |
洗脱液 | 20ml*1 |
使用说明书 | 1份 |
注意事项
1、 磁珠使用前一定要充分混匀。
2、如果下游实验对RNA 污染比较敏感,可在裂解时加1μl RNaseA(10mg/ml)。
3、尽可能采用新鲜抗凝血全血,非新鲜血液需按规定保存,家禽类血液红细胞有细胞核可减少血液量。
4、如果同等取样量下欲得到更多DNA 可以增加洗脱次数(洗脱次数最好不要超过3 次),也可以适当延长裂解时间。
操作步骤
1、裂解
取200μl抗凝血全血,加入480μl 裂解液S1、120μl 裂解液S2、20μl 蛋白酶 K(客户自备),然后转移至1.5ml EP 管中,吹打或点阵混合均匀。然后把EP 管置于恒温水箱中65℃温育30min。
2.结合
将EP管从温育设备中取出,加入振荡混匀的磁珠30μl、500μl 结合液,颠倒混匀2min,时文静置1min。将EP 管置于磁力架上进行磁分离,吸弃废液(注意吸净管盖及管底残液)。
3.洗涤
⑴ 加入600μl 70% 乙醇,吸打或点振5~10 次,然后磁分离,注意吸净管盖及管底的残液;
⑵ 重复步骤⑴一次,室温下开盖干燥10-20min或恒温箱(不高于55℃)内开盖干燥5min,注意防止污染。
4.洗脱
加入100μl 洗脱液,缓慢抽吸混匀,65℃温浴10min。每隔2~3min 轻摇EP管几下混匀。然后磁分离,小心吸取上清液至新的EP管中,即可进行下游实验。
常见问题及参考意见
得率低
(1)血液样品质量问题,抗凝血全血需低温保存;
(2)结合不充分;
结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态,并且充分颠倒混匀;
(3)取样量大于说明书给出量;
取样量请严格按照说明书操作。
条带弥散
(1)样品不新鲜或反复冻融多次:尽量用新鲜样品进行试验,如果样品需要保存,可根据试验,分装保存样品,尽量避免反复冻融;
(2)裂解时间太长:裂解时间不要超过60min;
(3)提取后模板DNA 放置时间太长:提取后如有需要,请尽量及时进行电泳试验。短期内可置于4℃保存,长期请置于-20℃保存(尽量注意避免反复冻融)。
DNA液有颜色
(1)洗涤过程不充分:如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状,要增加点震力度及次数,充分吹打混匀。
(2)裂解不充分:将组织充分研磨、适当增加裂解液S1和S2用量,也可以延长裂解时间。
(3)样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整:严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增大裂解液S1、S2、蛋白酶 K以及磁珠用量,其他试剂用量可不改变。
DNA样品不纯,干扰后续实验
(1)DNA液有乙醇残留:洗涤时,请注意吸净管盖及管底的残液。此外,磁珠应完全干燥,保证无乙醇残留。
(2)磁珠洗涤不充分:加入70% 乙醇时,请吸打或点振混匀。如有必要,可增加一次洗涤步骤。
(3)DNA液中吸入磁珠:如果不小心吸入磁珠,请将上清液返回原管,待磁珠完全吸附至管壁后重新吸取上清。或者将吸取的上清液10,000rpm离心2min,再取上清。
(4)DNA液中含有蛋白质等杂质:建议适当减少样品用量。
(5)DNA液中含有轻微盐离子等杂质,此为TE保存液正常现象,不影响下游实验。如有特殊需要,可使用等量的经高压灭菌的去离子水作为洗脱液。为方便实验,可将获得的DNA液置于-20℃环境分装保存。
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