One-Step 5x TMA PCR mix（恒温扩增试剂）

One-Step 5x TMA PCR mix（恒温扩增试剂）

I. 试剂盒货号

II. 试剂盒原理

试剂包含M-MLV反转录酶（RNAse H ）、T7 DNA polymerase、NTP、dNTP、Mg2 、RNAse Ihibitor、Buffer等.RNA转录、反转录以及DNA合成所需组分，仅需加入RNA或单链DNA模板即能开始恒等位RNA和DNA（双链）的合成反应

针对靶序列设计一对特异性引物，其中启动子引物上具有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列，这一引物与靶序列结合后，在反转录酶的作用下进行反转录反应形成 杂交分子。反转录酶所具有的RNAseH活性可 以水解RNA-DNA杂交分子中的RNA，释放带有T7 RNA聚合酶结合序列的单链。然后另外一条引物与该单链DNA结合，通过反转录酶合成带有T7 RNA聚合酶结合序列双链DNA。T7 RNA聚合酶则以该双链DNA为模板进行转录，由一分子模板，可得到多个拷贝的RNA转录本，这些RNA转录本又进入反应，作为的起始模板重复上述步骤。反应过程图如下：

III. 注意事项

1. 使用前混匀试剂，上机前请将体系混匀；

2. 试剂具有一定粘性，吸取前请先润湿枪头；

3. -20℃保存 ；

4. 如果不清楚所扩增的RNA或者单链DNA模板为正链还是反链，建议设计两套引物，其中一套引物的上游引物5’端添加T7-RNA 聚合酶结合序列，另外一套引物的下游引物5’端添加T7-RNA 聚合酶结合序列；

5. T7-RNA 聚合酶结合序列为：TAATACGACTCACTATAGGGAGA.

IV. 实验步骤

1. 混匀试剂盒中的PCR Mix。短暂离心使管中试剂集中于底部，冰上保存。

2. 按照下表内容，在冰上准备 PCR反应液。

3. PCR反应条件