货号 | 描述 | 规格 |
GBS-1016-021 | KASP lysis buffer直扩裂解液 | 200x150ul reactions (30ml) |
KASP lysis buffer直扩裂解液为KASP专用直扩裂解液，配合固德生物KASP 2X PCR mix 使用，可以不用稀释直接上样，适用于含叶绿素和不含叶绿素的样本，如水稻，小麦，番茄叶片，口腔拭子等。
实验步骤：1.样本裂解—2.混合PCR反应体系—3.PCR上机循环，扫描荧光，分析
1.样本裂解
植物叶片裂解步骤：
l 将叶子卷起，往1.5mL离心管 / 0.2mL八连管 / 0.2mL 96孔板中剪下约12.5px叶子；
l 通过6000rpm离心约30秒，将叶子甩至管底；
l 加入150μL直扩裂解液，沸水浴10分钟；之后将样本平衡至室温待用；
口腔拭子样本步骤：
(1) 不含保存液的口腔拭子样本
将已刮过口腔的口腔拭子细胞端剪至1.5mL 离心管，加入500μL直扩裂解液，震荡混匀约15秒；
将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟；（对于大部分引物，此步可省）
将样本以不超过1000 rpm的离心速度甩约10秒；平衡至室温待用；
(2) 含保存液的口腔拭子样本
处理方式1
将含有口腔拭子的保存液试管，用力上下混匀约10下（目的让细胞均匀悬浮于保存液中）；
在细胞沉淀前，吸取5μL保存液到300μL的直扩裂解液中，震荡混匀约15s；
将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟；（对于大部分引物，此步可省）
将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒；平衡至室温待用；
处理方式2
将含有口腔拭子的保存液试管，震荡约15秒；
震荡后的试管，以约3000rpm的离心速度离心1分钟；
将离心后的上清去除干净（不能残留多于10μL的残留保存液），同时去掉试管中的拭子；
往试管中加入500μL的直扩裂解液，震荡混匀15s；
将试管至于沸水中煮沸5~10 分钟；（对于大部分引物，此步可省）
将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒；平衡至室温待用；
2.混合PCR反应体系（10μL体系为例，）
组分 | 加量/μL | 备注 |
2x KASP PCRmix | 5 |
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引物mix | 0.4 | 分型引物1（10μM）：分型引物2（10μM）：下游通用引物R（10μM） = 0.1 : 0.1 : 0.2 （μL） |
处理后的样本（含直扩裂解液） | 5 | 不稀释，裂解液直接上机 |
（备注： 处理后的样本，不用稀释，直接上机做pcr扩增）
3.PCR上机循环，扫描荧光，分析:按照KASP试剂使用说明设置，NTC阴性对照须注意
(1) 含叶绿素叶片：KASP阴性对照（NTC）要含直扩裂解液，不能用水做阴性对照！
(2) 含口腔拭子保存液：KASP阴性对照（NTC）要包含和阳性孔一样，同比例的保存液和裂解液。
