Direct-PCR Lysis Buffer直扩裂解液为DNA快速提取专用试剂,可以用做普通PCR或SNP基因分型检测PCR扩增。该试剂在不明显影响PCR效果前提下,高效、快速处理样本,并短时间获取实验结果。
1实验步骤
样本裂解,稀释10~30倍— 混合PCR反应体系—3 PCR上机循环—电泳或者荧光扫描
2直扩样本处理方法
2.1钢珠打磨法样本处理
2.1.1 取约50px长植物叶片或者适量植物其他部位样本,置于深孔板,加5mm钢珠一颗,加固德生物400ul Direct-PCR Lysis Buffer ,高通量研磨机1800rpm(30赫兹) 研磨60s;
2.1.2 将深孔板3000rpm离心 3min;
2.1.3 吸10ul上清至普通PCR板,加90ul~290ul纯净水,混匀,待上机 。
(备注:根据研磨后上清的颜色深浅,可以对样本进行10到30倍的稀释,然后上机)
2.2煮沸法样本处理
2.2.1 取约0.5-25px长植物叶片或者适当量的植物其他部位样本,置于0.2mL八连管/0.2mL 96孔板,加入100uL固德生物Direct-PCR Lysis Buffer ,盖紧盖子/封板硅胶膜,放置沸水中煮沸10min;
2.2.2 将八连管/96孔板1000rpm轻甩20s;
2.2.3 吸10ul上清至普通PCR板,加90ul~290ul纯净水,混匀,待上机 。
(备注:根据研磨后上清的颜色深浅,可以对样本进行10到30倍的稀释,然后上机)
2.3动物细胞样本处理
PS:对于全血样本,在以下步骤开始前,应先对全血样本进行去血红素处理,然后收集沉淀细胞进行以下实验处理!
2.3.1 取适量细胞(去血红素的血细胞、培养细胞、微量组织块细胞或者口腔细胞)于1.5mL离心管/0.2mL八连管/0.2mL 96孔板, (如非细胞沉淀)3000rpm离心1min,去上清;
2.3.2 加入50~100uL 固德生物Direct-PCR Lysis Buffer,将细胞吹散约20s;
2.3.3 吸10ul上清至普通PCR板,加90ul纯净水,混匀,待上机 。
混合PCR反应体系(10μL体系为例,)
组分 | 加量/μL | 备注 |
2x Flu-ARMS PCRmix | 5 | |
引物mix | 0.4 | 分型引物1(10μM):分型引物2(10μM):下游通用引物R(10μM) = 0.1 : 0.1 : 0.3 (μL) |
处理后的样本(含直扩裂解液) | 5 | 不稀释,裂解液直接上机 |
3.PCR上机循环,扫描荧光,分析:按照KASP试剂使用说明设置,NTC阴性对照须注意
(1) 含叶绿素叶片:KASP阴性对照(NTC)要含直扩裂解液等比例稀释,不能用水做阴性对照!
(2) 含口腔拭子保存液:KASP阴性对照(NTC)要包含和阳性孔一样,同比例的保存液和裂解液。
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