KASP lysis buffer直扩裂解液

KASP lysis buffer直扩裂解液为KASP专用直扩裂解液，配合固德生物KASP 2X PCR mix 使用，可以不用稀释直接上样，适用于含叶绿素和不含叶绿素的样本，如水稻，小麦，番茄叶片，口腔拭子等。

实验步骤：1.样本裂解—2.混合PCR反应体系—3.PCR上机循环，扫描荧光，分析

1.样本裂解

植物叶片裂解步骤：

l 将叶子卷起，往1.5mL离心管 / 0.2mL八连管 / 0.2mL 96孔板中剪下约12.5px叶子；

l 通过6000rpm离心约30秒，将叶子甩至管底；

l 加入150μL直扩裂解液，沸水浴10分钟；之后将样本平衡至室温待用；

口腔拭子样本步骤：

(1) 不含保存液的口腔拭子样本

将已刮过口腔的口腔拭子细胞端剪至1.5mL 离心管，加入500μL直扩裂解液，震荡混匀约15秒；

将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟；（对于大部分引物，此步可省）

将样本以不超过1000 rpm的离心速度甩约10秒；平衡至室温待用；

(2) 含保存液的口腔拭子样本

处理方式1

将含有口腔拭子的保存液试管，用力上下混匀约10下（目的让细胞均匀悬浮于保存液中）；

在细胞沉淀前，吸取5μL保存液到300μL的直扩裂解液中，震荡混匀约15s；

将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟；（对于大部分引物，此步可省）

将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒；平衡至室温待用；

处理方式2

将含有口腔拭子的保存液试管，震荡约15秒；

震荡后的试管，以约3000rpm的离心速度离心1分钟；

将离心后的上清去除干净（不能残留多于10μL的残留保存液），同时去掉试管中的拭子；

往试管中加入500μL的直扩裂解液，震荡混匀15s；

将试管至于沸水中煮沸5~10 分钟；（对于大部分引物，此步可省）

将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒；平衡至室温待用；

2.混合PCR反应体系（10μL体系为例，）

（备注： 处理后的样本，不用稀释，直接上机做pcr扩增）

3.PCR上机循环，扫描荧光，分析:按照KASP试剂使用说明设置，NTC阴性对照须注意

(1) 含叶绿素叶片：KASP阴性对照（NTC）要含直扩裂解液，不能用水做阴性对照！

(2) 含口腔拭子保存液：KASP阴性对照（NTC）要包含和阳性孔一样，同比例的保存液和裂解液。