KASP lysis buffer直扩裂解液



 

货号

描述

规格

GBS-1016-021

KASP lysis buffer直扩裂解液

200x150ul reactions (30ml)

 

KASP lysis buffer直扩裂解液为KASP专用直扩裂解液,配合固德生物KASP 2X PCR mix 使用,可以不用稀释直接上样,适用于含叶绿素和不含叶绿素的样本,如水稻,小麦,番茄叶片,口腔拭子等。

实验步骤:1.样本裂解2.混合PCR反应体系3.PCR上机循环,扫描荧光,分析

1.样本裂解

植物叶片裂解步骤:

将叶子卷起,往1.5mL离心管 / 0.2mL八连管 / 0.2mL 96孔板中剪下约12.5px叶子;

通过6000rpm离心约30秒,将叶子甩至管底;

加入150μL直扩裂解液,沸水浴10分钟;之后将样本平衡至室温待用;

 

口腔拭子样本步骤:

(1) 不含保存液的口腔拭子样本

将已刮过口腔的口腔拭子细胞端剪至1.5mL 离心管,加入500μL直扩裂解液,震荡混匀约15秒;

将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟;(对于大部分引物,此步可省)

将样本以不超过1000 rpm的离心速度甩约10秒;平衡至室温待用;

(2) 含保存液的口腔拭子样本

处理方式1

将含有口腔拭子的保存液试管,用力上下混匀约10下(目的让细胞均匀悬浮于保存液中);

在细胞沉淀前,吸取5μL保存液到300μL的直扩裂解液中,震荡混匀约15s;

将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟;(对于大部分引物,此步可省)

将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒;平衡至室温待用;

处理方式2

将含有口腔拭子的保存液试管,震荡约15秒;

震荡后的试管,以约3000rpm的离心速度离心1分钟;

将离心后的上清去除干净(不能残留多于10μL的残留保存液),同时去掉试管中的拭子;

往试管中加入500μL的直扩裂解液,震荡混匀15s;

将试管至于沸水中煮沸5~10 分钟;(对于大部分引物,此步可省)

将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒;平衡至室温待用;

2.混合PCR反应体系10μL体系为例,

组分

加量/μL

备注

2x KASP PCRmix

 5


引物mix

0.4

分型引物1(10μM):分型引物2(10μM):下游通用引物R(10μM) = 0.1 : 0.1 : 0.2 (μL)

处理后的样本直扩裂解液

5

不稀释,裂解液直接上机

(备注: 处理后的样本,不用稀释,直接上机做pcr扩增)

3.PCR上机循环,扫描荧光,分析:按照KASP试剂使用说明设置,NTC阴性对照须注意

(1) 含叶绿素叶片:KASP阴性对照(NTC)要含直扩裂解液,不能用水做阴性对照!

(2) 含口腔拭子保存液:KASP阴性对照(NTC)要包含和阳性孔一样,同比例的保存液和裂解液。