货号 | 描述 | 规格 |
GBS-1016-021 | KASP lysis buffer直扩裂解液 | 200x150ul reactions (30ml) |
KASP lysis buffer直扩裂解液为KASP专用直扩裂解液,配合固德生物KASP 2X PCR mix 使用,可以不用稀释直接上样,适用于含叶绿素和不含叶绿素的样本,如水稻,小麦,番茄叶片,口腔拭子等。
实验步骤:1.样本裂解—2.混合PCR反应体系—3.PCR上机循环,扫描荧光,分析
1.样本裂解
植物叶片裂解步骤:
l 将叶子卷起,往1.5mL离心管 / 0.2mL八连管 / 0.2mL 96孔板中剪下约12.5px叶子;
l 通过6000rpm离心约30秒,将叶子甩至管底;
l 加入150μL直扩裂解液,沸水浴10分钟;之后将样本平衡至室温待用;
口腔拭子样本步骤:
(1) 不含保存液的口腔拭子样本
将已刮过口腔的口腔拭子细胞端剪至1.5mL 离心管,加入500μL直扩裂解液,震荡混匀约15秒;
将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟;(对于大部分引物,此步可省)
将样本以不超过1000 rpm的离心速度甩约10秒;平衡至室温待用;
(2) 含保存液的口腔拭子样本
处理方式1
将含有口腔拭子的保存液试管,用力上下混匀约10下(目的让细胞均匀悬浮于保存液中);
在细胞沉淀前,吸取5μL保存液到300μL的直扩裂解液中,震荡混匀约15s;
将离心管至于沸水中煮沸5~10 分钟;(对于大部分引物,此步可省)
将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒;平衡至室温待用;
处理方式2
将含有口腔拭子的保存液试管,震荡约15秒;
震荡后的试管,以约3000rpm的离心速度离心1分钟;
将离心后的上清去除干净(不能残留多于10μL的残留保存液),同时去掉试管中的拭子;
往试管中加入500μL的直扩裂解液,震荡混匀15s;
将试管至于沸水中煮沸5~10 分钟;(对于大部分引物,此步可省)
将样本以不超过1000 rpm的速度离心约10秒;平衡至室温待用;
2.混合PCR反应体系(10μL体系为例,)
组分 | 加量/μL | 备注 |
2x KASP PCRmix | 5 | |
引物mix | 0.4 | 分型引物1(10μM):分型引物2(10μM):下游通用引物R(10μM) = 0.1 : 0.1 : 0.2 (μL) |
处理后的样本(含直扩裂解液) | 5 | 不稀释,裂解液直接上机 |
(备注: 处理后的样本,不用稀释,直接上机做pcr扩增)
3.PCR上机循环,扫描荧光,分析:按照KASP试剂使用说明设置,NTC阴性对照须注意
(1) 含叶绿素叶片:KASP阴性对照(NTC)要含直扩裂解液,不能用水做阴性对照!
(2) 含口腔拭子保存液:KASP阴性对照(NTC)要包含和阳性孔一样,同比例的保存液和裂解液。
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