DNA直扩裂解液

 Direct-PCR Lysis Buffer直扩裂解液为DNA快速提取专用试剂,可以用做普通PCRSNP基因分型检测PCR扩增。该试剂在不明显影响PCR效果前提下,高效、快速处理样本,并短时间获取实验结果

1实验步骤

 样本裂解,稀释10~30倍— 混合PCR反应体系—3 PCR上机循环—电泳或者荧光扫描

      

2直扩样本处理方法

2.1钢珠打磨法样本处理

2.1.1  取约50px长植物叶片或者适量植物其他部位样本,置于深孔板,加5mm钢珠一颗,加固德生物400ul Direct-PCR Lysis Buffer ,高通量研磨机1800rpm30赫兹 研磨60s

2.1.2  将深孔板3000rpm离心 3min

2.1.3  10ul上清至普通PCR板,加90ul~290ul纯净水,混匀,待上机

(备注:根据研磨后上清的颜色深浅,可以对样本进行1030倍的稀释,然后上机)

 

2.2煮沸法样本处理

2.2.1  取约0.5-25px长植物叶片或者适当量的植物其他部位样本,置于0.2mL八连管/0.2mL 96孔板,加入100uL固德生物Direct-PCR Lysis Buffer ,盖紧盖子/封板硅胶膜,放置沸水中煮沸10min

2.2.2  将八连管/96孔板1000rpm轻甩20s

2.2.3  10ul上清至普通PCR板,加90ul~290ul纯净水,混匀,待上机

(备注:根据研磨后上清的颜色深浅,可以对样本进行1030倍的稀释,然后上机)

 

2.3动物细胞样本处理

PS:对于全血样本,在以下步骤开始前,应先对全血样本进行去血红素处理,然后收集沉淀细胞进行以下实验处理!

2.3.1  取适量细胞(去血红素的血细胞、培养细胞、微量组织块细胞或者口腔细胞)于1.5mL离心管/0.2mL八连管/0.2mL 96孔板, (如非细胞沉淀)3000rpm离心1min,去上清; 

2.3.2  加入50~100uL 固德生物Direct-PCR Lysis Buffer,将细胞吹散约20s

2.3.3  10ul上清至普通PCR板,加90ul纯净水,混匀,待上机 。

混合PCR反应体系10μL体系为例,

组分

加量/μL

备注

2x Flu-ARMS PCRmix

 5


引物mix

0.4

分型引物1(10μM):分型引物2(10μM):下游通用引物R(10μM) = 0.1 : 0.1 : 0.3 μL)

处理后的样本直扩裂解液

5

不稀释,裂解液直接上机

3.PCR上机循环,扫描荧光,分析:按照KASP试剂使用说明设置,NTC阴性对照须注意

(1) 含叶绿素叶片:KASP阴性对照(NTC)要含直扩裂解液等比例稀释,不能用水做阴性对照!

(2) 含口腔拭子保存液:KASP阴性对照(NTC)要包含和阳性孔一样,同比例的保存液和裂解液。