2X H-TECH PCR Premix

2x PCR Premix 是一种2倍浓度的PCR反应预混体系,体系中除了有PCR反应的必要组分外,还有PCR反应增强成分和稳定试剂保存能力组分。使用该试剂进行PCR实验,能减少大部分琐碎的PCR反应试剂配制操作,避免出现操作过程中可能会出现的少加、漏加或者重复加样情况,节省时间,大大降低了操作过程中污染的概率,最大程度保证了实验的成功率。

 

货号

描述

规格

单位

保质期

GDQ4001

2X H-TECH PCR Premix ,1ml

1ml

12个月

GDQ4005

2X H-TECH PCR Premix ,5ml

5ml

12个月

 

.使用特别注意事项:

1. 此试剂为多种物质混合物,久置可能会有微量沉淀生产,为正常现象,任何时候使用前请务必混匀

2. 长期保存请冻存于-20℃,一周内使用可以置于4℃保存;

3. 本试剂95℃预热时间最低不少于0.5 min;

试剂和引物、模板混合后请尽快进行实验,以确保得到最理想的结果。

 

二. 配样举例:

20ul体系举例

试剂

20μl体系(其他体系按比例调整)

终浓度

2x PCR Premix

10.0μl

PCR Forward Primer(10μM)

0.4μl~0.5μl

 

0.2~0.25μM

PCR Reverse Primer(10μM)

0.4μl~0.5μl

0.2~0.25μM

DNA template

1ng~100ng(cDNA推荐)

0.05~5 ng /μl

ddH2O

补水至20μl


 

三.程序举例:

(以bio-rad CFX96为例,对模板浓度为5ng/ul、长度为1000bp的目的基因进行扩增)

95℃  3 min;

G TO 40个循环



95℃  10s

60℃  25s

72℃  60s


72℃  5min

16℃  保温

 

PCR常见问题及其解决方案参考:

问题

可能的原因

解决方案

没有扩增产物或扩增产物量很低

目标基因的拷贝数过低或模板降解

增加模板浓度或使用新提取模板

模板降解或含有抑制聚合酶活性的抑制剂

对模板进行纯化或重新提取

引物设计不合理或者引物降解

重新设计引物或使用新溶解的引物

试剂久置 ,但使用前没有混匀

试剂使用前记得混匀

产生非特异性扩增或引物二聚体

 

引物设计不合理

考虑重新设计引物

模板浓度极低

增加模板浓度或使用新提取模板

PCR反应组分或环境存在污染

更换PCR反应组分,使用带滤芯的枪头