2x PCR Premix 是一种2倍浓度的PCR反应预混体系,体系中除了有PCR反应的必要组分外,还有PCR反应增强成分和稳定试剂保存能力组分。使用该试剂进行PCR实验,能减少大部分琐碎的PCR反应试剂配制操作,避免出现操作过程中可能会出现的少加、漏加或者重复加样情况,节省时间,大大降低了操作过程中污染的概率,最大程度保证了实验的成功率。
货号 | 描述 | 规格 | 单位 | 保质期 |
GDQ4001 | 2X H-TECH PCR Premix ,1ml | 1ml | 盒 | 12个月 |
GDQ4005 | 2X H-TECH PCR Premix ,5ml | 5ml | 盒 | 12个月 |
一.使用特别注意事项:
1. 此试剂为多种物质混合物,久置可能会有微量沉淀生产,为正常现象,任何时候使用前请务必混匀;
2. 长期保存请冻存于-20℃,一周内使用可以置于4℃保存;
3. 本试剂95℃预热时间最低不少于0.5 min;
试剂和引物、模板混合后请尽快进行实验,以确保得到最理想的结果。
二. 配样举例:
以20ul体系举例
试剂 | 20μl体系(其他体系按比例调整) | 终浓度 |
2x PCR Premix | 10.0μl | 1× |
PCR Forward Primer(10μM) | 0.4μl~0.5μl
| 0.2~0.25μM |
PCR Reverse Primer(10μM) | 0.4μl~0.5μl | 0.2~0.25μM |
DNA template | 1ng~100ng(cDNA推荐) | 0.05~5 ng /μl |
ddH2O | 补水至20μl |
三.程序举例:
(以bio-rad CFX96为例,对模板浓度为5ng/ul、长度为1000bp的目的基因进行扩增)
95℃ 3 min;
G TO 40个循环
95℃ 10s
60℃ 25s
72℃ 60s
72℃ 5min
16℃ 保温
四: PCR常见问题及其解决方案参考:
问题 | 可能的原因 | 解决方案 |
没有扩增产物或扩增产物量很低 | 目标基因的拷贝数过低或模板降解 | 增加模板浓度或使用新提取模板 |
模板降解或含有抑制聚合酶活性的抑制剂 | 对模板进行纯化或重新提取 | |
引物设计不合理或者引物降解 | 重新设计引物或使用新溶解的引物 | |
试剂久置 ,但使用前没有混匀 | 试剂使用前记得混匀 | |
产生非特异性扩增或引物二聚体
| 引物设计不合理 | 考虑重新设计引物 |
模板浓度极低 | 增加模板浓度或使用新提取模板 | |
PCR反应组分或环境存在污染 | 更换PCR反应组分,使用带滤芯的枪头 |
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