GDQ6008 | UltraPF DNA Polymerase Kit,,100ul ,500U | 500U,100ul | 支 |
GDQ6009 | UltraPF DNA Polymerase Kit,,200ul,1000U | 1000U,200ul | 支 |
贮存条件:-20℃
产品说明:本酶是一种高保真的耐热性DNA聚合酶,其保真度是Taq DNA聚合酶的8~10倍。该酶不仅具有5′-3′DNA聚合酶活性,还具有3′-5′核酸外切酶校对活性,能及时切除DNA合成链中碱基错配的核苷酸,大大增加了碱基配对的正确率,保证了DNA合成的高度忠实性。该酶不具有5′-3′核酸外切酶活性。
产品来源:E.coli重组菌株,含有从Pyrococcus furiosus中克隆的基因。
活性定义:以小牛胸腺DNA为模板,在72℃反应30min,能催化10nmol的dNTP聚合为多核苷酸片段的酶量定义为1个活性单位(U)。
产品浓度:5U/μl
储存缓冲液:[PH8.0] 20 mM Tris-HCl,100 mM KCl,0.1 mM EDTA,0.1 % NP-40 (v/v),0.1 % Tween-20(v/v),1 mM DTT,50 %甘油(v/v)。
反应缓冲液:[10×Pfu Buffer(含Mg2 )] 200 mM Tris-HCl(PH 8.8),100 mM KCl,160 mM(NH4)2SO4,1 % Triton X-100,1 mg/ml BSA,20 mM MgSO4
操作步骤:
用户自备试剂:dNTP混合物;水(无核酸酶);引物(上游、下游);模板
1.PCR反应体系的建立:
所有溶液完全融化后,温和充分振荡;
加入薄壁的PCR管中,冰上操作;50μl反应体系如下:
组分 | 加入体积(μl) | 终浓度 |
10X Buffer with Mg2 | 5 | 1X |
dNTP Mix,10mM | 1 | 0.2 mM |
上游引物 | X | 0.1-1.0μM |
下游引物 | Y | 0.1-1.0μM |
pfu (5 U/μl) | 0.5 | 2.5 U |
DNA模板 | Z | <0.5μg/50μl |
加水至 | 50μl |
Note:Pfu酶需在dNTPs加入后再加,否则Pfu酶的保真活力可能会降解引物,导致非特异性条带产生,产物得率下降。
2. PCR反应循环设置
程序 | 温度 | 时间 | 循环次数 |
预变性 | 95°C | 2 min | 1 |
变性 | 95°C | 2 min | 25-35 |
退火 | 42-65°C | 0.5-1 min | |
延伸 | 72°C | 2 min/kb | |
最后延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
3.结果检测:
反应结束后取5μl反应产物,琼脂糖凝胶电泳检测。
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